Extracción del Ácido Nucleico

Tema del Articulo: Método de la PCR para la identificación de especies de Candida en aislamientos clínicos.

Introducción

La incidencia de fungemias causadas por especies levaduriformes en pacientes inmunodeprimidos susceptibles, y la poca sensibilidad del cultivo de sangre convencional para detectar el crecimiento levaduriforme ha hecho necesario el desarrollo de enfoques alternativos para la detección temprana y la identificación de las especies causantes más importantes. De estas C. Albicans a sido reconocida como la principal y la más común de las especies relacionadas a las candidiasis, que supone entre el 80 y 90% de las causas de fungemias  diagnosticadas.

Debido a su gran sensibilidad y especificidad, el método molecular de la PCR está resultando exitoso, algunos laboratorios lo han implementado para la tipificación de aislamientos de Candida, señalándolo como una rápida y segura  herramienta para la identificación de varios hongos patógenos.

Tipo de muestras clinicas:

• De la mucosa oral.
• De la superficie de materiales protésicos o catéteres.
• Expectoraciones o fluidos de pacientes con sospecha de candidiasis sistémica o diseminada.

Pasos para la extracción de DNA

Para cada reacción, fue tomada una colonia de Candida directamente de un cultivo puro de cada aislamiento a ensayar crecido en agar dextrosa Sabouraud por 24h a 37°C y esta fue resuspendida en un vial cpm 300 µL de amortiguador de fosfatos.

1.-Lisis

Para degradar completamente la pared de los hongos se añadieron 125 U de liticasa, y se incubó por 30 min a 37°C agregando posteriormente proteinasa K y 100 µL de solución de extracción incubando nuevamente durante 12h a 65°C.

2.-Separación

Para la extracción y purificación del DNA fue utilizada la técnica de remoción de proteínas con fenolcloroformo

3.-Purificación

Para la precipitación del DNA fue añadido y lavado con 1mL de isopropanol absoluto frío seguido de etanol frío al 75%, centrifugando entre cada lavado a 14.000 rpm durante 10 min a 4°C.

4.-Análisis

El etanol se retiró, se desecó el DNA al aire libre durante 30 min y se resuspendió, cuantificó y ajustó a una concentración de 0,25 a 1 mg/µL para su posterior amplificación.

Las muestras de DNA obtenidas fueron conservadas a -80°C por tiempo indefinido hasta su utilización.

PCR - Picture

Traducción

La muerte celular isquémica a nivel neuronal

Los procesos que ocurren en la cascada isquémica, como la excitotoxicidad, la alteración de la homeostasis de calcio, el estrés oxidativo o la inflamación, pueden desembocar en una muerte celular.
Hasta hace poco más de 10 años se creía que la muerte que tenía lugar en la isquémia era de tipo necrótico, pero numerosas evidencias pusieron de relieve que también estaba ocurriendo un proceso apoptótico.
De hecho la muerte celular en la isquémia focal tiene un componente necrótico muy importante, aunque en la periferia del núcleo isquémico aparecen células con morfología apoptótica.

Bibliografia

• http://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/3591/nbb1de1.pdf?sequence=1

El proceso de Transcripción en el ACV

Muchos estudios genéticos que evalúan la fisiopatología y los mecanismos del accidente cerebrovascular se han llevado a cabo, lo que resulta en cientos de genes que parecen estar asociados con el ACV. Ademas, variantes genéticas relacionadas con otras etiologías del ACV, tales como aneurismas y la diabetes, lo cuales también han sido reportados.

Se seleccionaron once etiologías para el ACV incluyendo los factores de riesgo:

• Hipertensión
• La obesidad
• Diabetes mellitus tipo II
• Hiperlipidemia
• Aterosclerosis
• Coagulación de la sangre
• Inflamación vascular
• Efecto de los estrogenos
• Hiperhomocisteinemia
• Aneurisma intracraneal

Referencia Bibliografica

• http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3287476/

LA EPIGENÉTICA Y SU RELACIÓN CON LOS ACV

En el presente estudio, hemos invertigado la relacion entre los marcadores de estres oxidativo y los marcadores de inflamación en pacientes con ictus isquémico. Pacientes con accidente cerebrovascular isquémico con concentraciones séricas de PCR-as mayores, indicativo de una mayor respuesta inflamatoria, también tenían niveles séricos de MDA superiores e inferiores TAS que aquellos con concentraciones séricas de PCR-as menores. Esto se puede observar en las figuras, que muestran que los niveles de hsCRP en suero se correlacionan positivamente con productos de la peroxidación de lípidos y se correlacionan negativamente con TAS.

Podemos llegar a la conclusión:

1. La edad presentó un predominio en las personas mayores de 65 años.

2. Se encuentra mayor frecuencia de ECV en el sexo femenino en relación al
masculino.

3. Las formas clínicas: hemorragia intraparenquimatosa, subaracnoidea e
isquémica tuvieron una distribución homogénea en este estudio.

4. La frecuencia global de los principales factores de riesgo como la presión
arterial sistólica, diastólica, glucemia y lípidos, al obtener las medianas se
observó que existe mayor significancia en los casos que en los controles.

5. La enfermedad cerebrovascular presenta asociación positiva con la HTA,
DM2 y dislipidemia, siendo la HTA el factor de riesgo más asociado a la
ECV.

6. Existe asociación estadística entre ECV isquémico y los factores de riesgo
HTA, DM2 y dislipidemia.

Referencia Bibliográfica

• http://bvs.ucuenca.edu.ec/lildbi/docsonline/2/3/032-doi18.pdf
• http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3327567/

La Genética relacionada en Accidentes Cerebrovasculares

Podemos atribuir una responsabilidad genética a la mayoría de los casos de ACV. Los estudios indican que la existencia de una historia familiar de apoplejia, especialmente en el padre, constituyen un factor de riesgo importante. Los estudios indican que la existencia de una historia familiar de apoplejía, especialmente en el padre, constituye un factor de riesgo importante.

Un grupo de científicos halló mutaciones genéticas importantes que aumentarían el riesgo de padecer un accidente cerebrovascular (ACV) y que se encuentran en millones de personas.
"Este es un primer paso en el descubrimiento de las contribuciones genéticas a esta enfermedad debilitante"
Boerwinkle indicó que los equipos encontraron dos variantes genéticas en el cromosoma 12, cerca de dos genes que están implicados en el ACV. Uno, llamado WNK1, se relaciona con el control de la presión arterial y el otro, NINJ2, se vincula con la reparación de las lesiones cerebrales.
Ambos genes, próximos uno al otro, también están fuertemente ligados al ACV isquémico, que es el tipo más común de ACV y que se produce por un bloqueo en los vasos sanguíneos del cerebro.

Boerwinkle dijo que no está claro qué gen específico está involucrado, pero añadió que lo más probable es que sea el NINJ2.

Los investigadores encontraron dos cambios de una letra en el ADN, conocidos como polimorfismos de nucleótido simple o SNP, cerca del NINJ2, que parecen enviar la "señal" más fuerte de ACV. Uno está presente en alrededor del 20 por ciento de los blancos y el 10 por ciento de los afroamericanos evaluados.

Tener sólo una copia de esta variación genética puede aumentar cerca de un 30 por ciento el riesgo de ACV isquémico, señaló Boerwinkle, aunque el estudio indica que es poco probable que los SNP sean la causa real de ACV pese a estar asociados con la causa genética verdadera.

Factores genéticos específicos que están siendo investigados. Se están investigando determinados factores genéticos específicos. Algunos de ellos son los siguientes:

• El déficit congénito de los factores denominados proteína C y S, factores, que inhiben la coagulación de la sangre, puede ser la causante de ACV en adultos jóvenes, aunque un estudio indica que no es importante.
• Una mutación genética del factor V Leiden puede estar relacionada con riesgo de coagulación sanguínea. 
• Las personas que han heredado un gen llamado apolipoproteina (Apo) E-4 pueden correr un mayor riesgo de ACV. Este gen está también asociado con el de la enfermedad de Alzheimer. Se requieren, no obstante, más estudios.

Referencia Bibliográfica

• http://www.laseptima.info/noticias/14196
• http://www.geosalud.com/Enfermedades%20Cardiovasculares/accidente_cerebrovascular.htm

Enfermedad Cerebro Vascular

Se refiere a procesos o eventos cerebrales anormales, en el cual se ven comprometidos los vasos sanguíneos cerebrales causando distintas patologías al paciente.

Si el suministro de sangre hacia una parte del cerebro se ve interrumpida repentinamente o cuando un vaso sanguíneo en el cerebro se rompe, hablamos de la ECV. Las células cerebrales mueren cuando dejan de recibir oxigeno y nutrientes (ya que son sensibles al déficit de los mismos) de la sangre o cuando son dañadas por una hemorragia repentina en el cerebro o alrededor del mismo.

Se reconocen dos tipos de Enfermedad Cerebrovascular:

• El Accidente Cerebrovascular Isquémico
• El Accidente Cerebrovascular Hemorrágico 

ACV Hemorrágico - ACV Isquémico

Los ACV constituyen una de las principales causas de muerte en el mundo y la incidencia de padecerla aumenta con la edad; así las personas mayores de 65 años tienen un riesgo 7 veces mayor de morir de un ACV que la población en general.

Referencia bibliográfica

• http://espanol.ninds.nih.gov/trastornos/accidente_cerebrovascular.htm#Signs

Bienvenidos

Un saludo a todo el gremio de Estudiantes de Medicina, se les desea a cada uno de ustedes el mejor de los deseos y conjuntamente con ello que logren alcanzar sus expectativas profesionales, ademas el objetivo de este blog es aportar toda la información relevante al estudio de las ECV con las publicaciones mas actualizadas para que este a disposición de todos uds.